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原代細胞培養(yǎng)玻璃器皿的清洗

①原代細胞浸泡：新購進的玻璃器皿常帶有灰塵，呈弱堿性，或帶有鉛、碑等有害物質(zhì)，故先用自來水浸泡、水洗，然后再用2%~5%鹽酸浸泡或煮沸30min，水洗。要領(lǐng)：培養(yǎng)用后的玻璃器皿要立即泡入清水中，使下道刷洗工作能順利進行。用后的玻璃器皿常帶有大量的蛋白質(zhì)附著，干涸后不易刷洗掉，用后要立即用清水浸泡。②刷洗：用軟毛刷、洗滌劑，刷去器皿上的雜質(zhì)，沖洗晾干。要領(lǐng)：浸泡后的玻璃器皿用毛刷沾洗滌劑去器皿上的雜質(zhì)、刷洗次太多，會損害器皿的表面光潔度，洗滌劑有使pH上升的趨勢，所以易選用軟毛...

原代細胞線粒體膜勢能的檢測

原代細胞線粒體在細胞凋亡的過程中起著樞紐作用，多種細胞凋亡刺激因子均可誘導(dǎo)不同的細胞發(fā)生凋亡，而線粒體跨膜電位的下降，被認為是細胞凋亡級聯(lián)反應(yīng)過程中zui早發(fā)生的事件，它發(fā)生在細胞核凋亡特征(染色質(zhì)濃縮、DNA斷裂)出現(xiàn)之前，一旦線粒體DYmt崩潰，則細胞凋亡不可逆轉(zhuǎn)。線粒體跨膜電位的存在，使一些親脂性陽離子熒光染料如Rhodamine123、3，3-Dihexyloxacarbocyanineiodide[DiOC6(3)]、Tetrechloro-tetraethylbe...

哺乳動物轉(zhuǎn)錄調(diào)控原理分析

細胞系RNA聚合酶II是三大RNA聚合酶之一，存在于基因轉(zhuǎn)錄裝置的核心位置，編碼蛋白質(zhì)基因的轉(zhuǎn)錄受到RNA聚合酶的調(diào)控。RNA聚合酶解開DNA雙鏈，沿著一條鏈移動。在移動過程中，它們一邊“解讀”DNA鏈上的核苷，一邊合成一條相應(yīng)的RNA鏈。由PolII合成的RNA就是mRNA，它們將合成蛋白質(zhì)的指令傳給核糖體。過往的研究證實，在許多哺乳動物的多個基因進行轉(zhuǎn)錄時，RNAPII往往會在啟動子附近的某些特定區(qū)域發(fā)生停頓。這種停頓往往是發(fā)生在RNAPII復(fù)合體形成和轉(zhuǎn)錄起始之后。而這...

過氧化物酶標(biāo)記測定法原理

腫瘤細胞原理：脫氧核糖核苷酸衍生物地高辛[(digoxigenin)-11-dUTP]在TdT酶的作用下,可以摻入到凋亡細胞雙鏈或單鏈DNA的3-OH末端,與dATP形成異多聚體,并可與連接了報告酶(過氧化物酶或堿性磷酸酶)的抗地高辛抗體結(jié)合.在適合底物存在下,過氧化物酶可產(chǎn)生很強的顏色反應(yīng),特異準確的定位出正在凋亡的細胞,因而可在普通光學(xué)顯微鏡下進行觀察.毛地黃植物是地高辛的*來源.在所有動物組織中幾乎不存在能與抗地高辛杭體結(jié)合的配體,因而非特異性反應(yīng)很低.抗地高辛的特異性...

新生小鼠頸上交感神經(jīng)元分散細胞培養(yǎng)

原代細胞交感神經(jīng)系統(tǒng)在維持機體的正常功能和對環(huán)境的適應(yīng)性反應(yīng)中起著十分重要的作用。交感神經(jīng)細胞培養(yǎng)特別有助于神經(jīng)細胞發(fā)育和可塑性研究，利用體外培養(yǎng)系統(tǒng)可進行交感神經(jīng)細胞的發(fā)生、死亡、形態(tài)和生化發(fā)育、遞質(zhì)表形的獲得，以及靶組織與傳入纖維的突觸形成的研究。此外，通過體外培養(yǎng)系統(tǒng)可獲得關(guān)于神經(jīng)營養(yǎng)因子、激素，細胞因子等調(diào)節(jié)交感神經(jīng)元發(fā)育的信息，了解傳入纖維的輸入以及與靶組織的的機制。1、材料和方法實驗用出生當(dāng)天的昆明種小鼠，在無菌條件下腹部朝上固定于塑料泡沫板上,用微解剖鑷在解剖顯...

常見的細胞因子受體檢測的方法介紹

（一）活細胞系吸收試驗原理將過量的待測細胞與*細胞因子共孵育，若細胞膜表面存在相應(yīng)的細胞因子受體即可結(jié)合細胞因子，通過測定前、后細胞因子生物活性的對比情況可推測待測細胞表面細胞因子受體是否存在。方法1．過量的待測細胞、適量細胞因子準備。2．共孵育，時間根據(jù)待測細胞和細胞因子選擇。可設(shè)2h,4h,6h,8h和更長時間。3．離心（1500r/min,5分鐘）收集上清液。4．測定孵育前后的細胞因子活性。方法同細胞因子測定。注意事項此法簡便，適用于定性，但不適用于定量檢測。（二）核素...

原代細胞計數(shù)的操作步驟

（一）原代細胞計數(shù)1、將血球計數(shù)板及蓋片用擦試干凈，并將蓋片蓋在計數(shù)板上。2、將細胞懸液吸出少許，滴加在蓋片邊緣，使懸液充滿蓋片和計數(shù)板之間。3、靜置3分鐘。4、鏡下觀察，計算計數(shù)板四大格細胞總數(shù)，壓線細胞只計左側(cè)和上方的。然后按下式計算：細胞數(shù)/ml＝4大格細胞總數(shù)/4×10000注意：鏡下偶見由兩個以上細胞組成的細胞團，應(yīng)按單個細胞計算，若細胞團占10%以上，說明分散不好，需重新制備細胞懸液。（二）原代細胞活力1、將細胞懸液以0.5ml加入試管中。2、加入0.5ml0.4...

從原培養(yǎng)容器中分離細胞操作流程

細胞系從基層迅速分離細胞，且保持細胞完整性的一般步驟。這一步驟并不意味著對于所有細胞系的廣泛應(yīng)用，每一種系統(tǒng)*條件和施用濃度應(yīng)該根據(jù)經(jīng)驗加以確定。再次培養(yǎng)時檢測細胞的活性。細胞的活率應(yīng)該超過90%對于無血清培養(yǎng)基，降低胰蛋白酶使用量。1.移棄使用過的細胞培養(yǎng)基。2.使用不包含有鈣鎂的平衡鹽溶液或EDTA(ethylenediaminetetraaceticacid，乙二胺四乙酸.)清洗細胞系(看表確定正確的清洗溶液)。在培養(yǎng)瓶對著細胞的一面加入清洗溶液，通過轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶1到2分...