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成纖維細胞排除法操作流程

1.原代細胞機械刮除法：是用不銹鋼絲末端插有橡膠刮頭(用膠塞剪成三角形插以不銹鋼絲)、或裹少許脫脂棉制成，裝入試管中高壓滅菌后備用(也可用特制電熱燒灼器刮除)。刮除程序為：(1)標記：鏡下觀察，用不脫色筆在培養瓶皿的背面圈下生長腫瘤細胞的部位;(2)刮除：棄掉培養液，把無菌膠刮伸入瓶皿中，肉眼或顯微鏡窺視下，刮除無標記空間;(3)用Hanks液沖洗一兩次，洗除被刮掉的細胞;(4)注入培養液繼續培養，如發現仍有成纖維細胞殘留，可重復刮除至*除掉為止2.反復貼壁法：根據腫瘤細胞比...

對淋巴細胞系進行體外刺激預孵育、或板內同步刺激培養

1、將抗原和淋巴細胞系在體外混合，刺激并預孵育，是通用的方法。預孵育的淋巴細胞，在置入ELISPOT板之前應使用復溫到37℃的培養液清洗細胞1-2次。置入ELISPOT板以后通常在37℃培養5～6小時。2、對于高度特異性抗原，可以采用將淋巴細胞和抗原同時加入ELISPOT板孔中，37℃培養箱中，同步進行刺激、培養、和細胞因子捕獲。淋巴細胞板內同步刺激培養的時間通常為22～24小時。3、ELISPOT試驗檢測的是每一個分泌細胞系因子的活化細胞。在培養細胞過程中，任何移動、震動（...

細胞電穿孔轉染操作步驟

原代細胞對于細胞轉染而言，目前主要是轉染試劑(多為脂質體)的天下。磷酸鈣轉染的方法雖說有些out，但有些細胞還就認準這一套。不過，對于某些淋巴細胞而言，化學方法怎么都不奏效，那我們只能采取強硬手段，用電穿孔的方法進行轉染。應用電穿孔時，一般都選擇恒定的電容，然后在不同的場強下轟擊細胞，以摸索*實驗條件。就大多數細胞而言，在電穿孔后能有20-50%的細胞存活率就OK，足以保證DNA的成功轉染。電穿孔通常在室溫下進行，之后將細胞置于冰上，以延長原代細胞膜孔道開放的時間。與傳統的磷...

植物細胞質壁分離技術分析

(1)原代細胞質壁分離法：成長的植物細胞一般具有中央液泡，在中央液泡和細胞壁之間為細胞質的薄層及其內外膜——液泡膜和質膜。液泡中的胞液具有一定的溶質勢(或稱滲透勢)，而活的原生質特別是液泡膜和質膜則具有半透性。所以，當細胞與外界溶液接觸時，便與外液構成滲透系統，并可能發生水分的移動。若外液的水勢低于胞液的溶質勢，則水分外滲的結果可使原生質隨著液泡一起收縮而脫離細胞壁，發生質壁分離，質壁分離的細胞與水或水勢較高的溶液接觸時，可重新吸水而是質壁分離復原。原代細胞實驗步驟1、試劑的...

動物細胞培養技術研究開發和工業化

動物細胞培養技術研究開發和工業化動物細胞株（雜交瘤細胞、CHO細胞、昆蟲細胞等）大規模培養技術及其生物反應器工程可廣泛應用于抗體、基因重組蛋白質藥物、病毒疫苗等生物技術產品的研究開發和工業化，長期以來得到國家重大科技攻關計劃、863計劃等的大力支持，擁有一支精干的研究開發團隊和一系列現代化設備儀器，建立了由無血清懸浮培養技術、培養過程及生物反應器設計放大與強化技術、大規模高密度流加和連續灌注培養技術、培養過程計算機實時監測與控制技術、病毒類產品大規模技術等核心技術組成的大規模...

人類體細胞染色體標本制備實驗原理和操作步驟

人類體細胞染色體標本制備實驗原理和操作步驟實驗原理染色體是在顯微鏡下可見原代細胞有絲分裂過程中出現的結構。因此，必須獲得染色體標本才能進行檢查分析，通常情況下，都是利用外周血淋巴細胞進行核型分析。正常情況下，人體外周血淋巴細胞不再分裂，但植物血凝素（PHA）可刺激血中的淋巴細胞轉化成淋巴母細胞，使其恢復增殖能力。因此，可采取少量外周靜脈血，做短期培養，培養至72小時細胞進入增殖旺盛期，此時加入秋水仙素抑制細胞分裂，使細胞分裂停止在中期以獲得足夠量的分裂期細胞，經低滲、固定、制...

培養原代細胞時哪些問題需要注意

培養原代細胞時哪些問題需要注意1.原代細胞用1640加10%胎牛血清，有的種系用DMEM.血清要求質量較高，在普通血清中細胞生長不太好。1640用雙蒸水溶解，按說明加入碳酸氫鈉。2.培養液中應加入HEPES，起緩沖pH值的作用，否則會影響細胞狀態。如果用20%的HEPES，每次配培養液時每200ml培養液可加入5ml.加入HEPES后1640培養液顏色略呈橘黃色而非暗紅色。3.消化所用胰酶可選擇0.125%濃度，且不要消化時間太長。也有研究者認為不用胰酶，直接吹打使細胞脫壁，...

造血干細胞的基本特性

造血干細胞的基本特性造血干細胞的多向分化潛能使造血干細胞分化為各類祖細胞系,祖細胞又可以分化為各種類型的血細胞。在造血干細胞發育、成熟的過程中,除了分化為成熟的細胞,部分細胞會衰老、死亡。為了維持終生造血,造血干細胞會不斷地進行自我更新。但是在一次次的DNA復制和細胞分裂中又增加了突變的可能。在成體中,70%的HSC處于靜息狀態,這種狀態可使終生存在的造血干細胞可以盡可能減少由于增殖帶來的基因組不穩定性,降低細胞應激帶來的傷害。當造血干細胞受到信號刺激時,靜息的造血干細胞就會...