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不同細胞培養基的除菌方式及注意事項

細胞系培養基滅菌的方式分為高壓滅菌和膜過濾除菌，不同的培養基由于其營養成份不同，滅菌方式也可能不同。絕大多數細胞培養基不適宜高壓滅菌。因為高壓滅菌易破壞細胞培養基中的一些成份，如某些維生素等，因此，在通常的高壓滅菌型細胞培養基中，配方中的維生素種類與過濾型培養基相比較少，對于細胞系生長*的谷氨酰胺等，需待高壓后補充到培養基中。在高壓過程中，滅菌用器皿的選擇應注意避免蒸發或是污染。在大規模工業化中，可以采用短時超高溫處理的方法進行流水線式的滅菌，能夠提高自動化效率，降低成本。膜...

人外周T細胞的分離與鑒定

材料：淋巴細胞株懸液、1%SRBC懸液、滅活之小牛血清、離心管、試管、吸管、載玻片、0.8%戊二醛、瑞氏染液。方法（1）取上述配好之淋巴細胞懸液0.1ml于潔凈小試管中，加入1%SRBC懸液0.1ml。再加入小牛血清0.1ml，混勻，置37℃水浴箱中5分鐘，500轉/分，離心5分鐘，放4℃冰箱2-24小時。（2）從冰箱中取出試管，留適量上清液，輕輕搖勻，加0.8%戊二醛2滴，輕搖后，置4℃冰箱15分鐘，取出，作成涂片，待自然干燥，以瑞氏染液染色。（3）計數：鏡下觀察，凡結合三...

原代細胞培養實驗器具清洗步驟

原代細胞實驗器具清洗l玻璃類1、主要有：培養瓶，血清瓶，小青瓶，移液管，離心管，試管，培養皿等。2、清洗步驟：泡在含有洗潔凈的自來水中→撈出來用毛刷將實驗器具各個面刷洗至少25遍→自來水沖洗25遍→過一遍一蒸水→泡入鉻酸,過夜(24h左右)→從鉻酸中撈出器具，自來水沖洗25遍→過三遍一蒸水，三遍三蒸水→烘箱內烘干→收入柜子備用→用前高溫滅菌(121℃，25min)→烘干→使用。注意：新的玻璃器具先要泡鹽酸1天，然后清洗步驟與上面相同。l塑料類1塑料類器具主要包括：孔板，大槍頭...

影響哺乳動物細胞復蘇的因素

影響哺乳動物原代細胞復蘇的因素包括：（a）細胞類型，（b）生長階段，（c）細胞處于細胞周期的哪個階段，（d）終懸液中的細胞數量和濃度。可通過優化以上因素來提高復蘇細胞活力，另外，還需考慮凍存保護劑的特性以及凍存過程的具體操作。哺乳動物細胞培養對其他細胞和微生物的污染特別敏感，例如Hela細胞。由于這種特性，初始細胞系可通過同工酶分析、染色體組型分析、免疫分析或基因組分析，檢測來源。凍存前后均應該進行如上檢測。特別需要注意的是，病毒和支原體污染。一套完整健全的哺乳動物細胞系鑒定...

神經細胞分散培養

（一）細胞系選材常用胚胎動物或新生鼠神經組織。雞胚常用胚齡6-8d，新生鼠或胎鼠（12-14d）或人胚胎。不過也有認為與組織相關。如大白鼠胚胎以19d為宜，小鼠以18d為宜，大鼠紋狀體以10d為宜；若紋狀體與黑質聯合培養的大鼠胚，則黑質以13d，紋狀體18-21d為宜；小腦以20-21d小鼠胚胎，所獲蒲氏細胞成活率高，顆粒細胞正在分化；脊髓與DRG聯合培養，常用4-7d雞胚或12-14d小鼠胚胎，取材易，神經成活率高。（二）取材。腦則取出相應組織，在解剖液中先剪碎，以使胰酶消...

巨核細胞基本生理功能分析

巨核細胞株雖然在骨髓的造血細胞中為數zui少，僅占骨髓有核細胞總數的0.05%，但其產生的血小板卻對機體的止血功能極為重要。每個巨核細胞均可產生1000-6000個血小板。生成血小板的巨核細胞也是從骨髓中的造血干細胞分化發展來的。造血干細胞首先分化生成巨核系祖細胞，也稱巨核系集落形成單位(colonyformingunit-megakaryocyte,CFU-Meg)。祖細胞階段的細胞核內的染色體一般是2-3倍體。當祖細胞是2倍體或4倍體時，細胞具有增殖能力，因此這是巨核細胞...

原代細胞核的分離提取

(一)原代細胞操作步驟1．用頸椎脫位的方法處死小白鼠后，迅速剖開腹部取出肝臟，剪成小塊(去除結締組織)盡快置于盛有0.9％NaCl的燒杯中，反復洗滌，盡量除去血污，用濾紙吸去表面的液體。2．將濕重約1g的肝組織放在小平皿中，用量筒量取8ml預冷的0.25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化鈣溶液，先加少量該溶液于平皿中，盡量剪碎肝組織后，再全部加入。3．剪碎的肝組織倒入勻漿管中，使勻漿器下端浸入盛有冰塊的器皿中，左手持之，右手將勻漿搗桿垂直插入管中，上下轉動研磨3～5次，...

程序降溫盒提高細胞凍存的存活率的方法

1.細胞系實驗室凍存盒平時放4度，需要凍細胞時直接拿出來用就可以了。第二天轉移至液氮，貴重的細胞盡快轉移，不然會影響復蘇成活率的。一般是用5次就更換一下異丙醇。現在也有一些商品化凍存液可以直接丟進-80的，很方便，效果也不錯的。2.異丙醇的量是要保證的，不能低于表明的線，否則不能起到很好的程序性降溫作用，我們是在4度放置，放了細胞后立馬放到-80度冰箱，第二天再轉移到液氮，效果很不錯。異丙醇熔點：-87.9度的色透明具有乙醇氣味的可燃性有毒液體。注意了有可燃性!急性毒性：口服...