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原代細胞培養過程可能出現的問題及解決辦法

原代細胞培養過程中會出現這樣或那樣的問題，客戶遇到的問題從細胞生長角度來說，針對細胞不貼壁、生長緩慢、生長不好，甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對應的解決方法。一、培養細胞不貼壁可能原因：●胰蛋白酶消化過度●支原體污染●培養基pH值過堿（NaHCO3分解）●細胞老化●接種細胞起始濃度太低或太高解決方法：●縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度●分離培養物，檢測支原體。清潔支架或培養箱。如發現支原體污染，丟棄培養物。●使用無菌醋酸溶液調整pH值或充入無菌CO2●啟用新的保...

細胞株培養時消毒滅菌的方法

細胞株嚴格的消毒滅菌對保證細胞培養的成功是極為重要的，其方法分為物理法和化學法兩類。前者包括干熱、濕熱、濾過、紫外線及射線等，后者主要指使用化學消毒劑等。①熱滅菌：玻璃器皿，160~170℃，90~120min或180℃45~60min。②蒸氣滅菌：用于玻璃器皿、濾器橡膠塞、解剖用具、耐熱塑料器具、受熱不變性的溶液等，不同物品其有效滅菌壓力和時間不同，如培養用液、橡膠制品、塑料器皿等用68kPa(115℃)高壓滅菌10min;布類、玻璃制品、金屬器械等用103kPa(121....

ATCC細胞株解凍和培養操作推薦

凍存的ATCC細胞株和雜交腐細胞株在運送過程中使用干冰保持低溫。收到細胞后，可以立即解凍復蘇，去除二甲基亞砜（DSMO0）后進行細胞培養。如果不立即復蘇培養細胞，必須將細胞凍存管放置于液氮罐氣相層儲存。請不要將細胞存儲在-130℃以上的溫度。如果溫度不夠低，達不到-130℃，細胞活力會立即下降。ATCC細胞株產品附帶一份產品資料單，其中包含細胞株的信息和詳細的操作指南。細胞株的所有詳細介紹可以在ATCC找到，產品資料單也可以在ATCC下載。此外產品還附帶細胞株具體批次的檢測報...

原代細胞保存的主要方法之一細胞凍存

利用凍存技術將原代細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用。除此之外，還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。細胞凍存時向培養基中加入保護劑--終濃度5％．15％的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點降低，加之在緩慢凍結條件下，細胞內水分透出，減少了冰晶形成，從而避免細...

原代細胞培養基的保存方法分析

原代細胞培養基的保存方法分析1.干粉，買了后一定要保存在4度。有人保存在-20度我認為沒有必要。但4度是非常必要的。保證期是有提示的。2.配好的無血清培養基一定保存在4度，保存不要超過3個月。用時根據提示要加入谷胺酰胺。3.加入血清的培養基，保存在4度不要超過1個月，從時間太長，活性下降。當然稍微長點也不一定出問題。但是根據細胞而定;如果原代培養，新鮮，如果是原代細胞，或僅維持傳代就不太要緊。但是原則是越新越好。786-O[786-0],人腎透明腺癌細胞HumanHEC-1A...

原代細胞如何消除組織培養的污染

原代細胞當重要的培養污染時，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母，把污染細胞與其它細胞系隔離開，用實驗室消毒劑消毒培養器皿和超凈臺，檢查HEPA過濾器。高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性，因而，做劑量反應實驗確定抗生素和抗霉菌素產生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養污染的實驗步驟。①在無抗生素的培養基中消化、計數和稀釋細胞，稀釋到常規原代細胞傳代的濃度。...

哪些方法可以使細胞適應無血清培養基

1．細胞株直接適應法式—將細胞直接從添加血清的培養基轉換到無血清培養基中。2．連續適應或循序隔絕法—分幾步將細胞從添加血清的培養基轉換到無血清培養基中。與直接適應法相比較，連續適應法對于細胞更溫和些。為了使細胞適應無血清培養基，關鍵是細胞培養應滿足以下條件：1．處于對數生長中期2．存活率大于90%3．在適應期間，以較高的初始細胞株接種量進行接種下面列出了常規適應步驟。初始細胞接種量、細胞產量和培養周期是連續優化的良好開端。直接適應有些類型的細胞可以直接從含有血清培養基適應無血...

干細胞過濾器的產品優勢

干細胞過濾器是一種用于細胞過濾和分離的微流體器件。本產品由一個封閉的流體通道作為細胞過濾器腔體，1、在細胞過濾器腔體的兩端設有流體的輸入端口；2、和流體輸出端口；3、在流體的輸入端口和流體輸出端口之間設置細胞過濾裝置即細胞顆粒阻擋器；4、在細胞顆粒阻擋器旁為流體池；5、細胞阻擋結構可阻擋流體中較大的細胞，并使之聚集在流體池中，并被流體池中的相關抗體所捕獲。通過外加的物理或化學作用，使其破碎或滅活，達到細胞過濾的作用。干細胞產品說明：尼龍網格大小為40微米、70微米以及100微...