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原代細(xì)胞試探性的開端

研究人員成功培養(yǎng)出來自小鼠胚胎的原代細(xì)胞。他們很快意識(shí)到這項(xiàng)發(fā)現(xiàn)的巨大潛力，因?yàn)檫@些細(xì)胞既能自我復(fù)制，又可被推動(dòng)變成身體200余種細(xì)胞類型中的任何一種。不過，此項(xiàng)技術(shù)并不容易在靈長類動(dòng)物身上實(shí)現(xiàn)。威斯康辛大學(xué)麥迪遜分校生物學(xué)家JamesThomson花了14年時(shí)間，才將該技術(shù)成功用于猴子。3年后，Thomson利用生育治療中未使用的捐贈(zèng)胚胎，創(chuàng)建了人類ES細(xì)胞系。此項(xiàng)發(fā)現(xiàn)激起了一場道德風(fēng)暴。批評(píng)者——大多數(shù)來自宗教界——認(rèn)為胚胎構(gòu)成了人類的一部分，并且想阻止任何涉及破壞胚胎的...

細(xì)胞株的形態(tài)學(xué)觀察和檢定

細(xì)胞株的形態(tài)學(xué)觀察及鑒定：細(xì)胞換液后直接在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)及生長特征，并作相差攝影，同時(shí)進(jìn)行常規(guī)HE染色觀察并攝片。鑒定采用DAB免疫組織化學(xué)法，在6孔培養(yǎng)板中放置載玻片，在玻片上植入2ml含有1×106的細(xì)胞懸液，待細(xì)胞貼壁后，取出載玻片，放入-20℃的冷丙酮中固定30min,用PBS沖洗3次，每次2min,滴加3%H2O2室溫孵育10min，PBS沖洗3次，每次2min,以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。滴加兔抗人Ⅷ因子相關(guān)抗原多抗工作液，放入濕盒內(nèi)4℃過夜，同時(shí)另...

腫瘤細(xì)胞如何進(jìn)行傳代？

腫瘤細(xì)胞是科研實(shí)驗(yàn)中常用到的細(xì)胞，當(dāng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞達(dá)到90%融合時(shí)，需要對細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)。首先培養(yǎng)瓶的準(zhǔn)備：用纖維粘連蛋白（BPF，貨號(hào)#8248）包被培養(yǎng)瓶，包被濃度為2ug/cm2，包被時(shí)間為4度過夜或37度一小時(shí)。將培養(yǎng)基（ECM，貨號(hào)#1001）、胰酶/EDTA消化液（T/S，貨號(hào)#0103）、胰酶中和液（TNS，貨號(hào)#0113）和無鈣鎂離子的磷酸鹽緩沖液（DPBS，貨號(hào)#0303），溫度回復(fù)至室溫，我們不推薦用37°C水浴加熱試劑和培養(yǎng)基。棄去原培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基，...

原代細(xì)胞因子中全血的標(biāo)本處理方法

原代細(xì)胞因子中全血的標(biāo)本處理方法分析：我們針對全血：使用肝素鈉抗凝的真空采血管采血，不易采用肝素鋰、EDTA和ACD抗凝劑，血樣在8小時(shí)內(nèi)分析，超過8小時(shí)會(huì)導(dǎo)致活性的損失，一般細(xì)胞因子陽性細(xì)胞會(huì)減少5%。如不能在8小時(shí)之內(nèi)檢測，應(yīng)將真空采血管水平室溫放置。自身血漿中外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs）：使用肝素鈉抗凝的采血后，分離PBMCs，24小時(shí)內(nèi)分析。組織培養(yǎng)基中的外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs）：用Ficoll分離PBMCs，將細(xì)胞重懸于含10%熱滅活胎牛血清（FBS）的RP...

細(xì)胞系如何分配任務(wù)并解決問題

從生物學(xué)角度了解不同類型細(xì)胞系如何一起工作是一個(gè)極大的未知數(shù)。例如，我們不知道大腦中每種細(xì)胞的數(shù)量，甚至連腦細(xì)胞的類型都還處于持續(xù)爭論狀態(tài)。一個(gè)恰當(dāng)?shù)睦碚摽蚣埽梢约兴械膶?shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和觀點(diǎn)，共同用于理解生物的復(fù)雜性。1950s，人們開發(fā)了信息理論，用于研究如何用有效的方式發(fā)送信息，減少錯(cuò)誤。這個(gè)理論也與大腦神經(jīng)元的相互交流有關(guān)。Sharpee利用信息學(xué)理論識(shí)別支配生物復(fù)雜性的基本定律，用它來預(yù)測系統(tǒng)內(nèi)總共有多少種細(xì)胞，以及這些細(xì)胞應(yīng)該如何協(xié)作。2015年，研究人員們將他們的這...

細(xì)胞株計(jì)數(shù)的難題與解決方案

細(xì)胞株和病毒的放大培養(yǎng)面臨挑戰(zhàn)。當(dāng)需要量增加千倍時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶對于工業(yè)規(guī)模是不可行的。微載體為生物反應(yīng)器中貼壁細(xì)胞的生長提供了方便，微載體充當(dāng)貼壁細(xì)胞可附著的支架，允許它們增殖，而生物反應(yīng)器使細(xì)胞-微載體復(fù)合體自由懸浮在培養(yǎng)基中。因此，貼壁細(xì)胞也可以像懸浮細(xì)胞那樣生長，從而簡化了放大培養(yǎng)，并允許利用現(xiàn)有的資源用于過程優(yōu)化和。傳統(tǒng)方法的微載體的細(xì)胞計(jì)數(shù)耗時(shí)耗力，且計(jì)數(shù)結(jié)果不準(zhǔn)確，需要離心樣品、PBS重懸、胰蛋白酶消化細(xì)胞和臺(tái)盼藍(lán)或者結(jié)晶紫染色等多個(gè)步驟來計(jì)數(shù)在微載體上生長的細(xì)胞...

原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室檢測方法

原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室檢測（一）包涵體的檢測。1.血片及白細(xì)胞涂片制備采集的抗凝血標(biāo)本盡快用血球?qū)油蒲稍锖罄浔潭?0min；或提取抗凝血中的白細(xì)胞并進(jìn)行涂片，待干燥后冷丙酮固定10min。2.染色通常采用瑞氏（Wright）染色法、姬氏（Giemsa）染色法及瑞－姬混合染色法。有條件的實(shí)驗(yàn)室，可使用美國CDC推薦的染色方法。3.染液配置方法（1）瑞－姬染液：取瑞氏染料和姬氏染料各0.5g，以甲醇研溶，加甲醇500ml保存，每天搖勻１次，１周后可使用。（2）改良McDona...

原代細(xì)胞增殖生長數(shù)值的步驟

測定原代細(xì)胞增長數(shù)值常用zui簡便的方法。一般過程為1.接種21孔/24孔板細(xì)胞（如用培養(yǎng)瓶時(shí)則21瓶）。2.分7組，每組3孔（或瓶），培養(yǎng)一周（7天），期間逐日檢測一組，計(jì)數(shù)。3.把7天中的細(xì)胞數(shù)值繪成圖，即為細(xì)胞生長曲線。實(shí)驗(yàn)材料細(xì)胞試劑、試劑盒胰蛋白酶儀器、耗材吸管實(shí)驗(yàn)步驟1.懸液制備取待測生長狀態(tài)良好細(xì)胞，增長至接近匯合時(shí)，向培養(yǎng)瓶內(nèi)加1ml升0.25%胰蛋白酶液，37℃溫箱中消化，至細(xì)胞接近脫離瓶壁前吸出消化液、加新的培養(yǎng)液、輕吹打制備成細(xì)懸液、計(jì)數(shù)；2.接種向每孔...