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ARTICLES細胞特性:
1)】組織來源于實驗動物的正常眼組織。
2)細胞鑒定:細胞免疫熒光染色為陽性。
3)經鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
5)細胞生長方式:上皮樣,不規則細胞,貼壁培養。
產品名稱:恒河猴胚腎細胞;FRhK-4
規格:1×10?cells/T25培養瓶
貨號:YS-02X9593
細胞生長實驗 :細胞生長良好,形態正常
儲存條件:2℃-8℃,避光儲存
運輸條件:冰袋冷藏運輸
公司產品僅用于科研
細胞培養步驟
一.培養基及培養凍存條件準備:
1) 準備RPMI-1640 培養基;優質胎牛血清,10%;Glutamax(invitrogen 35050061),1%;Sodium pyruvate(invitrogen 11360070),1%;雙抗,1%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入250px皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
注意事項:
(1)凍存前細胞狀態,細胞最好在對數生長期,細胞密度適合,剛剛發生細胞融合,過密或連成片的細胞狀態不好,而且消化時不容易分散;
(2)凍存的密度不宜過低,10的6次方-7次方的數量級比較好,我凍存的細胞一般T25培養瓶(5*107),一瓶凍一管(1.5ml凍存管),10cm培養皿(大概10的8次方個細胞)分成兩管。
(3)消化和吹打,切忌胰酶消化過度,吹打不可太用力,最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養基吹打哦,不是加入凍存液再吹打。
(4)離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于腫瘤細胞株而言要求不是很嚴格,我從10%-90%都用過,問題不大,個人認為10%-20%可以了,能節約處就節約點嘛!另外,凍存液可以在處理細胞前配置,放在4度冰箱預冷。細胞離心后直接用預冷的凍存液重懸,移入凍存管。
(5)關于“慢凍",傳統的方法,LLC細胞凍存管用棉花包好,4度2h,-20度2h或更長,-80度過夜,最后液氮。對于條件較好的實驗室和細胞凍存數量多的實驗室,推薦使用程序降溫盒,內裝異丙醇,在-80度并內可以逐漸降溫,很方便,省了包棉花、4度、-20度了。
使用步驟:
一)準確稱量試劑:根據不同的菌類和用途,選擇適宜的培養基,培養基所需試劑必須純凈。
(二)校正pH值:將稱量好的培養基各種成分放入容器內,標記劃線,加熱溶解,補充水分,測定酸堿度,常用pH6.8~8.0的精密試紙或酸度計測定。用1N NaOH和1N HCl調節pH值到適宜范圍內。
(三)過濾:將玻璃漏斗置鐵架上,再用人子宮成纖維細胞*培養基紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中,將上述培養基倒入其中過濾至透明。
(四)分裝:將過濾后的培養基分裝于中試管或三角瓶內(試管內每支裝5mL;三角瓶中裝100~150ml),塞好棉塞用牛皮紙包扎好,準備滅菌。
(五)滅菌:培養基的滅菌,常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營養細胞在水中煮沸后即被殺死,但細菌的芽胞有較強的抗熱性,須經高壓蒸汽滅菌才能達到*滅菌的目的。根據蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理,即壓力越大,蒸汽溫度就越高。因此,在同一溫度條件下,采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下,菌體吸收水分后,其蛋白質易于凝固變性,因為蒸汽的穿透力強,殺菌效果好。
phospho-FAK(pSer732)/FITC 熒光素標記抗磷酸化粘著斑激酶抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Rabbit bovine IgG/Gold 金標記兔抗IgG(10或15nm)Multi-class antibodies規格: 0.5ml
纖維母細胞生長因子3抗體 FGF3/Oncogene INT2 0.1ml
Mouse Goat IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標記的小鼠抗羊IgG 0.1ml
FREM1 英文名稱: 細胞外基質蛋白FREM1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-SYN1(Ser553) 磷酸化神經突觸素1抗體 規格 0.1ml
Rabbit bovine IgG/Gold 金標記兔抗IgG(10或15nm)Multi-class antibodies規格: 0.5ml
NPY1R (neuropeptide Y1 receptor) 神經肽Y1受體抗原Multi-class antibodies規格: 0.5mg
AR 雄受體抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh phospho-ATG3 (Tyr18) 磷酸化自噬相關蛋白3抗體 規格 0.1ml
鼠兔通用SABC(HRP)試劑盒 200片 Vector分裝
USF-1 英文名稱: 等上游刺激因子1抗體 0.1ml
DHH 英文名稱: DHH蛋白抗體 0.2ml
AR 雄受體抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
SMARCA2 英文名稱: ATP依賴解旋酶SMARCA2抗體 0.2ml
EGFL7 英文名稱: 類表皮生長因子域7抗體 0.1ml
硫酯包含蛋白-1抗體 Thioster-containing protein 1 1ml
TM/Biotin 生物素化血栓調節蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-LAT (Tyr171) 磷酸化T細胞活化連接蛋白抗體 規格 0.1ml
BAFF/CD257(B cell activating factor) TNF家族B細胞激活因子抗原Multi-class antibodies規格: 0.5mg
恒河猴胚腎細胞;FRhK-42,2’-脫水尿苷;環尿苷八角麻酵母溶解試劑盒
X-gal;5-溴-4氯-3吲哚基β-D半乳糖牛白藤酵母凍存試劑盒
X-GlcA ;5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-葡糖苷酸環己鹽布渣葉酵母菌YPD培養基
X-GlcA ;5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-葡糖苷酸環己鹽松塔酵母菌YPD培養基
TOPS;N-乙基-N-(3-磺基)-3-鈉鹽葶藶子(播娘蒿)酵母菌DOB培養基
TBHBA;2,4,6-三溴-3-羧基百部(對葉百部)酵母菌DOBA培養基
N-乙基-N-(3-磺基)-3-甲氧基苯鈉鹽沉香酵母菌YNB培養基
TOOS;N-乙基-N-(2-羧基-3-磺基)-3-鈉鹽崗松酵母菌YNBA培養基
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