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腫瘤細胞培養成纖維細胞排除法

腫瘤細胞刮除法：是用不銹鋼絲末端插有橡膠刮頭（用膠塞剪成三角形插以不銹鋼絲）、或裹少許脫脂棉制成，裝入試管中高壓滅菌后備用（也可用特制電熱燒灼器刮除）。刮除程序為：（1）標記：鏡下觀察，用不脫色筆在培養瓶皿的背面圈下生長腫瘤細胞的部位；（2）刮除：棄掉培養液，把無菌膠刮伸入瓶皿中，肉眼或顯微鏡窺視下，刮除無標記空間；（3）用Hanks液沖洗一兩次，洗除被刮掉的細胞；（4）注入培養液繼續培養，如發現仍有成纖維細胞殘留，可重復刮除至*除掉為止2．反復貼壁法：根據腫瘤細胞比成纖維細...

正確復蘇原代細胞的方法

原代細胞凍存好了，接下來要注意什么問題呢?沒錯，就是記得到時間了，拿出來復蘇。那么，細胞復蘇的過程中又有哪些該注意的事項呢?細胞活力和形態檢查的作用何在?請看下文：活力檢查–千萬不要使用不健康的細胞，可能有污染，如果發現有污染毫不猶豫的丟棄!形態檢查–檢查細胞的固有形態和生長行為。凍存細胞：補充新的培養液–在您開始凍存細胞的前一天補充新的培養液。在細胞長至70%單層時收獲細胞，計數活細胞數，用凍存液調整細胞密度~5x106cells/ml(根據不同的細胞類型調整)凍存液–用凍...

如何使細胞培養物快速適應無血清培養基？

許多原代細胞系容易適應無血清培養基和無蛋白培養基，而對環境要求過高的其它細胞卻難以適應變化，這就需要更為專業的方法來適應變化。而根據細胞系的特性，有兩種方法可使細胞適應無血清培養基。*種方法是連續適應/循序隔絕法；另一種方法是直接適應。一、連續適應/循序隔絕法*種方法是連續適應/循序隔絕法。通過一系列的血清還原步驟，使細胞適應無血清培養基。這是優先選用的方法，且不對細胞培養環境形成太過惡劣的變化。連續適應/循序隔絕法——方法1使原培養基內的細胞連續地經過以下幾個階段：階段1：...

兔食管上皮細胞培養步驟

原代細胞實驗材料：1.大兔的正常食管組織2.6孔培養板：用多聚賴氨酸4℃包被過夜3.不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素和200000U/L慶大霉素，pH7.44.手術刀、解剖剪、解剖鑷、眼科剪，眼科鑷實驗方法：1.處死大兔，取正常食管組織放入含雙抗的PBS（pH=7.2）中反復清洗3次，以洗去組織表面的血絲及粘液；2.小心的用眼科剪鑷將食管黏膜與黏膜下組織分離；3.分離出的粘膜組織用含雙抗的PBS（pH=7.2）反復沖洗若...

腫瘤細胞培養方法

腫瘤細胞培養成功關鍵在于：取材、成纖維細胞的排除、選用適宜的培養液和培養底物等幾個方面。在具體培養方法方面，腫瘤細胞培養與正常組織細胞培養并無原則差別，初代培養應用組織塊和消化培養法均可。1、取材：人腫瘤細胞來自外科手術或活檢瘤組織。取材部位非常重要，體積較大的腫瘤組織中有退變或壞死區，取材時盡量避免用退變組織，要挑選活力較好的部位。癌性轉移淋巴結或胸腹水是好的培養材料。取材后宜盡快進行培養，如因故不能立即培養，可貯存于4℃中，但不宜栽過24小時。2、培養基：腫瘤細胞對培養基...

應用細胞融合技術制備染色體

原代細胞實驗目的通過細胞融合技術，初步了解染色體提前凝集標本制備原理、方法及間期細胞三種時相的提前凝集染色體特點。【實驗用品】一、材料人宮頸癌上皮細胞(HeLa細胞)二、器材和儀器顯微鏡、離心機、水浴箱、熱吹風機、10ml刻度離心管、5(1/2)針頭注射器、試管架、染色槽、廢液缸、吸水紙、擦鏡紙、冰凍載玻片、香柏油瓶、記號筆、酒精燈。三、試劑50％PEG、Hanks液(pH7.4)、RPMI一1640培養基(含10％滅活小牛血清，pH7.4)10μg／ml秋水仙素，0.075...

細胞培養過程中添加劑起到的作用

腫瘤細胞能量來源：谷氨酰胺L－谷氨酰胺是一種氨基酸，細胞的重要能量來源、參與蛋白質的合成和核酸代謝。同時L-谷氨酰胺不穩定，在中性的水溶液中會自發降解；降解產物對細胞有毒性（對干細胞，原代細胞影響尤其大）。能影響細胞活性、蛋白表達水平及糖基化模式等。那如何解決呢？方案有二：?選擇不含谷氨酰胺的培養基，自己添加?選擇穩定的谷氨酰胺替代物經過科學家不斷努力，終于找到了穩定的谷氨酰胺替代物：glutaGRO。它有何方功能呢？原來，它是由L-丙氨酸和L-谷氨酰胺縮合形成的二肽，穩定性...

細胞培養技術注意事項

1.原代細胞實驗進行前，無菌室及無菌操作臺(laminarflow)以紫外燈照射30-60分鐘滅菌，以70%ethanol擦拭無菌操作抬面，并開啟無菌操作臺風扇運轉10分鐘后，才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株，且即使培養基相同亦不共享培養基，以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以70%ethanol擦拭無菌操作抬面。操作間隔應讓無菌操作臺運轉10分鐘以上后，再進行下一個細胞株之操作。2.無菌操作工作區域應保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、...