PCR反應鑒定——PCR反應條件:

【產品名稱】多殺巴斯德菌探針法熒光定量PCR試劑盒
【英文名稱】Pasteurella multocida
【產品編號】YSP7053
【包裝規格】50T
【預期用途】
產品僅用于科研本產品可用于肉及肉制品中鴨源性成分的定性檢測，所用儀器為實時熒光PCR儀，可通過實時擴增曲線判斷樣品中是否存在鴨源性成分。
【檢驗原理】
本試劑盒采用實時熒光PCR技術，針對鴨源性成分核酸序列設計特異性引物和熒光探針，通過實時熒光一步法RT-PCR（Taqman探針法）對鴨源性成分核酸進行定性檢測。
*的擴增性能:
高性能的UNICONTM Taq DNA聚合酶及優化的反應體系保證更高的擴增效率。以相同量的293T細胞cDNA為模板，擴增β-actin基因，與同類產品相比，UNICONTM qPCR Master Mix擴增信號更強，擴增效率更高。
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PCR實驗方法步驟：
多殺巴斯德菌探針法熒光定量PCR試劑盒方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。
產品僅用于科研其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領域常規參照基因，較佳地管家基因，優選地為RPPH1的擴增區域，其中所述質粒載體為本領域常規質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。
其中所述待測目的基因為本領域常規待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
實驗步驟：
典型的PCR由
（1）高溫變性模板；
（2）引物與模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反應組成一個循環，通過多次循環反應，使目的DNA得以迅速擴增。其要步驟是：
將待擴增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復性溫度下分別與目的基因兩側的兩條單鏈互補結合，兩個引物在模板上結合的位置決定了擴增片段的長短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因為模板從5’→3’方向延伸，合成DNA的新互補鏈。
Shikonin異檸檬脫酶檢測試劑盒20mg

濱蒿內酯 訂購|咨詢 規格： 20mg 間隙連接蛋白45抗體 CK-BB ELISA Kit 肌激酶同工酶BB(CK-BB)ELISA試劑盒

Geniposide鹽阿樂定標準品規格：規格：人腺瘤性結腸息肉病蛋白(Protein APC)ELISA試劑盒 0.2ml

人干擾素γ (IFNγ)ELISA Kit Brn2  大腦蛋白2抗體規格:96T/48T規格:25mgN酰βD氨基葡萄糖苷酶檢測試盒20mg人卵巢透明細胞癌細胞，ES2細胞1x10^6cells

Sennoside D異鎖鏈素檢測試劑盒20mg

棉籽糖;Raffinose 規格： 20mg 訂購|咨詢 L-O2(人正常肝細胞)5×106cells/瓶×2

Hordenine阿瑞吡坦對照品標準品規格：規格：人醛還原酶1-B10(Aldo-keto reductase family 1 member B10)ELISA試劑盒 0.2ml

人細胞間粘附分子1(ICAM1)（CD54）ELISA KIT Reg3a  胰島β細胞生長子抗體規格:96T/48TArsanilic Acid規格:20mgOX40 Ligand檢測試盒5mg人卵巢腺癌細胞，OVCAR3細胞1x10^6cells

金石蠶甙二熒光素；熒光素二；熒光素二鹽5mg

 MS751(人子宮頸表皮細胞)5×106cells/瓶×2

AM (Adrenomedullin; ADM)  上腺髓質素（多肽抗原）*神經酪氨激酶受體2檢測試盒25gHuman/人Elisa試盒49540003

2',7'二(2羧基)5(6)羧基熒光素酰（5mM 無水DMSO溶液）5mg

綠草定(標準品) 質量規格：分析標準品 Triclopyr

5HTR1A (5HT1A (5hydroxytryptamine/serotonin receptor 1A; 5HT1a; ADRBRL1; ADRB2RL1; HTR1A)  5羥色胺受體1A(多肽)進口、分裝腫瘤壞死子受體超家族成員1B檢測試盒10gHuman/人Elisa試盒49540003

木蝴蝶甙B2',7'二(2羧基)5(6)羧基熒光素酰5mg

 人胚肺成纖維細胞英文名稱：KMB17

TIMP2(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase2)  金屬蛋白酶組織抑制子2(抗原)進口、原裝膠原啶交聯檢測試盒1gHuman/人Elisa試盒495409
多殺巴斯德菌探針法熒光定量PCR試劑盒黑介子苷 CAS號： 3952985 規格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

維生素B5 CAS號： 137086 規格： HPLC≥99%;20mg 訂購|咨詢

枸杞多糖 CAS號：  規格： ;500mg 訂購|咨詢

睪 CAS號： 58220 規格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

可的松 CAS號： 50237 規格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

黃體 CAS號： 57830 規格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

刺囊 CAS號： 510305 規格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

山梨 CAS號： 50704 規格： 0.99;20mg 訂購|咨詢

補骨脂查爾 CAS號： 28448853 規格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

葉黃素 CAS號： 127402 規格： HPLC≥95%;20mg 訂購|咨詢

褪黑素 CAS號： 73314 規格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

山梨 CAS號： 110441 規格： HPLC≥99%;250mg 訂購|咨詢

三七總皂苷 CAS號： 88105297 規格： HPLC≥70%;20mg 訂購|咨詢

沒食子 CAS號： 831618 規格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

黃芪黃 CAS號：  規格： HPLC≥70%;20mg 訂購|咨詢