公司產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品名稱：泛素連接酶E3A(UBE3A)重組蛋白   

物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Recombinant Ubiquitin Protein Ligase E3A (UBE3A)

ANCR; AS; E6-AP; EPVE6AP; HPVE6A; Papilloma Virus E6-Associated,Angelman Syndrome; Oncogenic protein-associated protein E6-AP; Renal carcinoma antigen NY-REN-54

酶與激酶

發(fā)育科學(xué)

相關(guān)產(chǎn)品：
Recombinant Human NSDHL宿主: E.Coli標(biāo)簽: N-terminal His-IF2DI Tag規(guī)格: 50μg, 200μg, 1mg種屬: Human

Recombinant Human PABPC4宿主: E.Coli標(biāo)簽: N-terminal His-IF2DI Tag規(guī)格: 50μg, 200μg, 1mg種屬: Human

Recombinant Human CCND1宿主: E.Coli標(biāo)簽: N-terminal His-IF2DI Tag規(guī)格: 50μg, 200μg, 1mg種屬: Human

Recombinant Human CASQ2宿主: E.Coli標(biāo)簽: N-terminal His Tag規(guī)格: 50μg, 200μg, 1mg種屬: Human

標(biāo)簽選擇：

親和標(biāo)簽：蛋白重組表達(dá)過程中采用親和標(biāo)簽融合表達(dá)有兩方面的作用：一方面是為了使蛋白純化過程變得更加容易；另一方面是為了促進(jìn)某些不溶性蛋白可溶。蛋白標(biāo)簽可分兩類：一類是短肽類標(biāo)簽；一類是長肽以融合蛋白（fused partner）形式共表達(dá)。使用不同的蛋白標(biāo)簽需要根據(jù)具體案例來分析。

不同的系統(tǒng)步驟稍微有些不同的，大致步驟如下：

真核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟：

a.      選擇表達(dá)載體和宿主細(xì)胞（常用的CHO和HEK293）

b.      表達(dá)載體的構(gòu)建

c.      無內(nèi)毒素的質(zhì)粒抽提

d.      細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染

e.      表達(dá)小試，條件優(yōu)化

f.       表達(dá)分析和鑒定（SDS-PGAE和WB）

g.      大量表達(dá)

h.      親和純化

i.        檢測(cè)和鑒定

原核表達(dá)系統(tǒng)的重組蛋白表達(dá)步驟：

a.      選擇表達(dá)載體

b.      密碼子優(yōu)化

c.      基因合成/亞克隆

d.      轉(zhuǎn)化表達(dá)菌株

e.      蛋白表達(dá)小試分析

f.       如果蛋白可溶，蛋白親和純化

g.      如果蛋白不可溶，則需要變復(fù)性來制備可溶蛋白。

h.      鑒定，包括SDS-PAGE和WB鑒定

GZMH蛋白；表達(dá)蛋白的分析、純化、檢測(cè)

　　誘導(dǎo)表達(dá)成功后，表達(dá)蛋白的分析、純化、檢測(cè)應(yīng)該順當(dāng)，按一般的實(shí)驗(yàn)步驟做沒太大的問題。

操作步驟 ：

根據(jù)使用量，取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF，使 PMSF 的zui終濃度為 1mM。混勻備用（PMSF 現(xiàn)用現(xiàn)加）。

1、樣品前處理：

a)對(duì)于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。

b)對(duì)于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液，再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成 50-100 萬細(xì)胞/管，然后再裂解。

c)對(duì)于組織樣品： 把切成細(xì)小的碎片。按照每 20mg 組織加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

2、后處理：

將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的蛋白濃度測(cè)定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作

特點(diǎn)：

標(biāo)記：標(biāo)記反應(yīng)簡單、溫和且很少抑制抗體活性，將與抗體共價(jià)結(jié)合是一種非常簡便、直接的標(biāo)記方法。

酶標(biāo)記：酶標(biāo)記抗體是將酶與特異性抗體經(jīng)適當(dāng)方法連接而成，其應(yīng)用范圍非常廣泛，結(jié)果即時(shí)可見、敏感性高。

熒光標(biāo)記：熒光基團(tuán)AbFluorTM是新型的熒光標(biāo)記物之一，產(chǎn)品覆蓋350-770nm。不同的AbFluor基團(tuán)經(jīng)恰當(dāng)?shù)募す饪砂l(fā)光， 從而得知抗體的定位和待測(cè)抗原的分布情況，主要用于細(xì)胞分選或高分辨率免疫染色，是一種非常好的亞細(xì)胞水平定位的方法。

Angiopoietin 2產(chǎn)品名稱: 生成su2抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig

GADD45A產(chǎn)品名稱: 生長DNA損傷基因45抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Pig, Cow

ADRA1A產(chǎn)品名稱: alpha 1腎上su能受體A抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep, GuineaPig

Neurotensin Receptor 1產(chǎn)品名稱: 神經(jīng)降壓su受體1抗體交叉反應(yīng): Human

CARD15/D2產(chǎn)品名稱: 凋亡加強(qiáng)結(jié)構(gòu)域蛋白15抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit

HADHB產(chǎn)品名稱: 羥輔meiA脫氫meiβ抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Rabbit, Sheep

NPEPL1產(chǎn)品名稱: 氨肽mei樣蛋白1抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Cow

應(yīng)用類型: Other英文名稱: CD59英文別名: CD59 glycoprotein; CD59 molecule (CD59 blood group); 1F5 antigen; 20 kDa homologous restriction factor; MAC-inhibitory protein; ECM1產(chǎn)品名稱: 細(xì)胞外基質(zhì)蛋白1抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Cow

Histone H3 (Acetyl K23)產(chǎn)品名稱: 乙酰化組蛋白H3抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Rabbit, Fruit Fly
泛素連接酶E3A(UBE3A)重組蛋白人抗雙載蛋白(AMPH)抗體ELISA試劑盒AMPH抗雙載蛋白ELISA試劑盒Human anti amphiphysin(AMPH)antibody ELISA kit

人抗雙鏈DNA抗體/天然DNA(dsDNA)抗體(IgM)ELISA試劑盒dsDNA抗雙鏈DNA抗體/天然DNAelisamei聯(lián)免疫試劑盒Human anti-double stranded DNA(dsDNA)antibody(IgM)ELISA Kit

人抗鼠抗體(HAMA)ELISA試劑盒HAMA抗鼠抗體elisa檢測(cè)試劑盒Human antimous antibody,HAMA ELISA

人抗嗜中性粒細(xì)胞胞漿抗體(ANCA)ELISA試劑盒ANCA抗嗜中性粒細(xì)胞胞漿抗體elisa kitHuman ANCA ELISA Kit

人抗生長激su(GH)抗體ELISA試劑盒GH抗生長激suELISA試劑盒Human anti-growth hormone(GH)antibody ELISA Kit