產(chǎn)品名稱(chēng)：肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基

規(guī)格：100mL/125mL×4
貨號(hào)：YS-02X10015

細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn) ：細(xì)胞生長(zhǎng)良好，形態(tài)正常

儲(chǔ)存條件：2℃-8℃，避光儲(chǔ)存

運(yùn)輸條件：冰袋冷藏運(yùn)輸
公司產(chǎn)品僅用于科研

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備RPMI-1640 培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；Glutamax（invitrogen 35050061），1%；Sodium pyruvate（invitrogen 11360070），1%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：

（1）凍存前細(xì)胞狀態(tài)，細(xì)胞最好在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，細(xì)胞密度適合，剛剛發(fā)生細(xì)胞融合，過(guò)密或連成片的細(xì)胞狀態(tài)不好，而且消化時(shí)不容易分散；

（2）凍存的密度不宜過(guò)低，10的6次方-7次方的數(shù)量級(jí)比較好，我凍存的細(xì)胞一般T25培養(yǎng)瓶（5*107），一瓶?jī)鲆还埽?.5ml凍存管），10cm培養(yǎng)皿（大概10的8次方個(gè)細(xì)胞）分成兩管。

（3）消化和吹打，切忌胰酶消化過(guò)度，吹打不可太用力，最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦，不是加入凍存液再吹打。

（4）離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對(duì)于腫瘤細(xì)胞株而言要求不是很?chē)?yán)格，我從10%-90%都用過(guò)，問(wèn)題不大，個(gè)人認(rèn)為10%-20%可以了，能節(jié)約處就節(jié)約點(diǎn)嘛！另外，凍存液可以在處理細(xì)胞前配置，放在4度冰箱預(yù)冷。細(xì)胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸，移入凍存管。

（5）關(guān)于“慢凍"，傳統(tǒng)的方法，LLC細(xì)胞凍存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更長(zhǎng)，-80度過(guò)夜，最后液氮。對(duì)于條件較好的實(shí)驗(yàn)室和細(xì)胞凍存數(shù)量多的實(shí)驗(yàn)室，推薦使用程序降溫盒，內(nèi)裝異丙醇，在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。

使用步驟：

一）準(zhǔn)確稱(chēng)量試劑：根據(jù)不同的菌類(lèi)和用途，選擇適宜的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基所需試劑必須純凈。

（二）校正pH值：將稱(chēng)量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi)，標(biāo)記劃線，加熱溶解，補(bǔ)充水分，測(cè)定酸堿度，常用pH6.8～8.0的精密試紙或酸度計(jì)測(cè)定。用1N NaOH和1N HCl調(diào)節(jié)pH值到適宜范圍內(nèi)。

（三）過(guò)濾：將玻璃漏斗置鐵架上，再用人子宮成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中，將上述培養(yǎng)基倒入其中過(guò)濾至透明。

（四）分裝：將過(guò)濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶?jī)?nèi)（試管內(nèi)每支裝5mL；三角瓶中裝100～150ml），塞好棉塞用牛皮紙包扎好，準(zhǔn)備滅菌。

（五）滅菌：培養(yǎng)基的滅菌，常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞在水中煮沸后即被殺死，但細(xì)菌的芽胞有較強(qiáng)的抗熱性，須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達(dá)到*滅菌的目的。根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理，即壓力越大，蒸汽溫度就越高。因此，在同一溫度條件下，采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下，菌體吸收水分后，其蛋白質(zhì)易于凝固變性，因?yàn)檎羝拇┩噶?qiáng)，殺菌效果好。

細(xì)胞特性：

1)】組織來(lái)源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常眼組織。

2)細(xì)胞鑒定：細(xì)胞免疫熒光染色為陽(yáng)性。

3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式：上皮樣，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
TRAF1/Biotin 生物素化壞死因子受體相關(guān)因子1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

BRCA1(Breast cancer susceptbility gene 1)(human) 癌易感基因1抗原(人)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

CD40結(jié)合蛋白/CD40受體相關(guān)因子1抗體  TRAF3/CD40bp 0.1ml

Sidekick 1 英文名稱(chēng)： 細(xì)胞粘附分子伴侶蛋白1抗體 0.2ml

ELAVL2 + ELAVL4 英文名稱(chēng)： ELAVL2+ELAVL4蛋白抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-IRS-2(Ser731) 磷酸化胰島素受體底物2抗體 規(guī)格 0.1ml

BRCA1(Breast cancer susceptbility gene 1)(human) 癌易感基因1抗原(人)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

LTB4(Mouse Leukotriene B4) ELISA Kit 小鼠白三烯B4Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

 CX3CR1/FITC 熒光素標(biāo)記抗CX3C趨化因子受體1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh DCTN1/Dynactin 1 動(dòng)力蛋白激活蛋白1抗體 規(guī)格 0.1ml

Guinea IgG/APC 熒光素APC標(biāo)記豚鼠IgG 0.1ml

Stathmin 英文名稱(chēng)： 白血病相關(guān)蛋白18/癌蛋白18抗體 0.1ml

(2NP-AHD)呋喃妥因代謝物單克隆抗體 小鼠單抗 0.05

 CX3CR1/FITC 熒光素標(biāo)記抗CX3C趨化因子受體1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rabbit  mouse IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗小鼠IgG 0.1ml

Phospho-FADD (Ser191) 英文名稱(chēng)： 磷酸化Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體 0.1ml

C型鈉尿肽抗體  CNP/CNPase 0.1ml

 phospho-p38 ERK/MAPK14 (pThr180/pTyr182) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠、兔、馬、犬、豬、磷酸化原活化蛋白激酶p38抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PIK3C3/PI3 kinase type 3 磷脂酰肌醇激酶3催化亞單位3抗體 規(guī)格 0.1ml

Goat  human IgA/Biotin 生物素化羊抗人IgAMulti-class antibodies規(guī)格： 0.3ml
肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基Toxoplasma gondii RFLP基因分析試劑盒20次人甲酰甲硫（fMet）ELISA試劑盒,

Trypanosoma congolense RFLP基因分析試劑盒20次人尿游離皮質(zhì)醇（UFC）ELISA試劑盒,

Hepatitis B virus RFLP基因分析試劑盒20次人血清素/血清（ST）ELISA試劑盒,

Human cytomegalovirus （HCMV）RFLP基因分析試劑盒20次人胸腺肽（Thymosin）ELISA試劑盒,

human herpesviruses RFLP基因分析試劑盒20次人高敏甲狀腺素（u-T4）ELISA試劑盒,

C. albicans RFLP基因分析試劑盒20次人TU3A蛋白（TU3A）ELISA試劑盒,

C. glabrata RFLP基因分析試劑盒20次人角化因子（KAF）/雙調(diào)蛋白（AR）ELISA試劑盒,

C. tropicalis RFLP基因分析試劑盒20次小鼠可溶性CD30（sCD30）ELISA試劑盒,

C. krusei RFLP基因分析試劑盒20次小鼠內(nèi)皮素1（ET-1）ELISA試劑盒,

C. guilliermondii RFLP基因分析試劑盒20次大鼠葉酸（FA）ELISA試劑盒,

C. parapsilosis RFLP基因分析試劑盒20次大鼠醛固酮（ALD）ELISA試劑盒,

Cr. Neoformans RFLP基因分析試劑盒20次兔子間粘附分子2（ICAM-2/CD102）ELISA試劑盒,

A. fumigatus RFLP基因分析試劑盒20次布氏瓊脂   用于彎曲桿菌分離（SN標(biāo)準(zhǔn)）- 布氏瓊脂

F. solani RFLP基因分析試劑盒20次L-異亮甲酯鹽酸鹽

Helicobacter pylori RFLP基因分析試劑盒20次Apiosylskimmin Apiosylskimmin