產(chǎn)品名稱：肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基

規(guī)格：100mL/125mL×4
貨號(hào)：YS-02X9977

細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn) ：細(xì)胞生長(zhǎng)良好，形態(tài)正常

儲(chǔ)存條件：2℃-8℃，避光儲(chǔ)存

運(yùn)輸條件：冰袋冷藏運(yùn)輸
公司產(chǎn)品僅用于科研

細(xì)胞特性：

1)】組織來(lái)源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常眼組織。

2)細(xì)胞鑒定：細(xì)胞免疫熒光染色為陽(yáng)性。

3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式：上皮樣，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備RPMI-1640 培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；Glutamax（invitrogen 35050061），1%；Sodium pyruvate（invitrogen 11360070），1%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：

（1）凍存前細(xì)胞狀態(tài)，細(xì)胞最好在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，細(xì)胞密度適合，剛剛發(fā)生細(xì)胞融合，過(guò)密或連成片的細(xì)胞狀態(tài)不好，而且消化時(shí)不容易分散；

（2）凍存的密度不宜過(guò)低，10的6次方-7次方的數(shù)量級(jí)比較好，我凍存的細(xì)胞一般T25培養(yǎng)瓶（5*107），一瓶?jī)鲆还埽?.5ml凍存管），10cm培養(yǎng)皿（大概10的8次方個(gè)細(xì)胞）分成兩管。

（3）消化和吹打，切忌胰酶消化過(guò)度，吹打不可太用力，最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦，不是加入凍存液再吹打。

（4）離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對(duì)于腫瘤細(xì)胞株而言要求不是很嚴(yán)格，我從10%-90%都用過(guò)，問(wèn)題不大，個(gè)人認(rèn)為10%-20%可以了，能節(jié)約處就節(jié)約點(diǎn)嘛！另外，凍存液可以在處理細(xì)胞前配置，放在4度冰箱預(yù)冷。細(xì)胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸，移入凍存管。

（5）關(guān)于“慢凍"，傳統(tǒng)的方法，LLC細(xì)胞凍存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更長(zhǎng)，-80度過(guò)夜，最后液氮。對(duì)于條件較好的實(shí)驗(yàn)室和細(xì)胞凍存數(shù)量多的實(shí)驗(yàn)室，推薦使用程序降溫盒，內(nèi)裝異丙醇，在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。

Tumstatin/Col4a3/FITC 熒光素標(biāo)記抑素抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

CBP(CREB-binding protein) CREB結(jié)合蛋白抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

磷酸化鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體  phospho-CaMK2a 0.1ml

SDHA 英文名稱： 琥珀酸脫氫酶復(fù)合體亞基A抗體 0.1ml

E.coli DH-5 Alpha 英文名稱： DH5α大腸桿菌菌體蛋白抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh Phospho-HSP27 (Ser15) 磷酸化熱休克蛋白27抗體 規(guī)格 0.1ml

CBP(CREB-binding protein) CREB結(jié)合蛋白抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Activin A 大鼠活化素 AMulti-class antibodies規(guī)格： 48T

 Dnmt3 Beta DNA甲基轉(zhuǎn)移酶-3β抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh NCOA3/KAT13B/AIB1/SRC-3 類固醇受體激活蛋白3抗體 規(guī)格 0.2ml

Human major histocompatibility complex I ,MHC I /HLA I ELISA Kit 人主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類 96T

Syndecan-1 英文名稱： 多配體蛋白聚糖1抗體 0.1ml

C Peptide 英文名稱： C-肽抗體 0.1ml

 Dnmt3 Beta DNA甲基轉(zhuǎn)移酶-3β抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rabbit  mouse Kappa light chain/HRP 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈 0.1ml

FXYD1 英文名稱： 磷酸神經(jīng)膜抗體 0.1ml

周期素D2抗體  Cyclin D2 0.1ml

 PAFR/FITC 熒光素標(biāo)記抗血小板活化因子受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-VAV1(Tyr160) 磷酸化鳥(niǎo)苷酸轉(zhuǎn)換因子VAV1抗體 規(guī)格 0.1ml

Rabbit IgG/Biotin 生物素化兔IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 1ml
肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基細(xì)胞RUNX3蛋白表達(dá)熒光定量檢測(cè)試劑盒10/50 次神經(jīng)酶（梭菌）

RUNX3蛋白表達(dá)西方雜交分析試劑盒5次開(kāi)環(huán)異落葉松樹(shù)脂酚二葡萄糖苷 Secoisolariciresinol diglucoside 1

RUNX3蛋白共沉淀分析試劑盒5次GST瓊脂糖凝膠4B

RUNX3蛋白表達(dá)ELISA定量檢測(cè)試劑盒25次丁基瓊脂糖凝膠4B

細(xì)胞COLLAGEN I蛋白表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測(cè)試劑盒10/20次一縮二

載玻片細(xì)胞COLLAGEN I蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20次人胃泌素釋放肽前體（ProGRP）ELISA試劑盒,ProGRP ELISA kit

凍切片組織COLLAGEN I蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20次人破骨分化因子（ODF）ELISA試劑盒, ODF ELISA

石蠟切片組織COLLAGEN I蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20次人脾臟酪酶（Syk）ELISA試劑盒,

載玻片細(xì)胞βCOLLAGEN I蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20次人血管緊張素Ⅱ受體2（AT2R）ELISA試劑盒,

凍切片組織COLLAGEN I蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20次人富組蛋白（HTN5）ELISA試劑盒,

石蠟切片組織COLLAGEN I蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20次小鼠白介素15（IL-15）ELISA試劑盒,

細(xì)胞COLLAGEN I蛋白表達(dá)比色法定量檢測(cè)試劑盒10/50 次小鼠載脂蛋白H（Apo-H）ELISA試劑盒,

細(xì)胞COLLAGEN I蛋白表達(dá)熒光定量檢測(cè)試劑盒10/50 次小鼠β內(nèi)啡肽受體（β-EPR）ELISA試劑盒,

COLLAGEN I蛋白表達(dá)西方雜交分析試劑盒5次小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2（TGFβ2）ELISA試劑盒,

COLLAGEN I蛋白共沉淀分析試劑盒5次小鼠游離狀腺原（Free-T3）ELISA試劑盒,

使用步驟：

一）準(zhǔn)確稱量試劑：根據(jù)不同的菌類和用途，選擇適宜的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基所需試劑必須純凈。

（二）校正pH值：將稱量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi)，標(biāo)記劃線，加熱溶解，補(bǔ)充水分，測(cè)定酸堿度，常用pH6.8～8.0的精密試紙或酸度計(jì)測(cè)定。用1N NaOH和1N HCl調(diào)節(jié)pH值到適宜范圍內(nèi)。

（三）過(guò)濾：將玻璃漏斗置鐵架上，再用人子宮成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中，將上述培養(yǎng)基倒入其中過(guò)濾至透明。

（四）分裝：將過(guò)濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶?jī)?nèi)（試管內(nèi)每支裝5mL；三角瓶中裝100～150ml），塞好棉塞用牛皮紙包扎好，準(zhǔn)備滅菌。

（五）滅菌：培養(yǎng)基的滅菌，常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞在水中煮沸后即被殺死，但細(xì)菌的芽胞有較強(qiáng)的抗熱性，須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達(dá)到*滅菌的目的。根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理，即壓力越大，蒸汽溫度就越高。因此，在同一溫度條件下，采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下，菌體吸收水分后，其蛋白質(zhì)易于凝固變性，因?yàn)檎羝拇┩噶?qiáng)，殺菌效果好。